案例一分析:CRISPR-Cas9技術敲除酵母菌ADE1基因
泓迅生物利用CRISPR-Cas9技術編輯酵母菌中的一個920bp的ADE1基因。ADE1是腺嘌呤合成相關基因,如果ADE1失活,則細胞將會積累紅色色素,呈現紅色菌落。
陽性克隆菌落
測序結果顯示,轉化子的ADE1基因缺失了18個堿基,被成功編輯。
案例二分析:CRISPR-Cas9技術將熒光蛋白基因敲入大腸桿菌
泓迅生物研究人員通過開發完善CRISPR-Cas9雙質粒基因編輯系統及其生產工藝,成功將906bp的紅色熒光蛋白(mScarlet)編碼基因敲入到菌株E.coli的NC101基因組上 Clbp編碼區域,敲入成功率高達96.6%~100%。
圖1 mScarlet基因敲入后克隆子的PCR鑒定電泳圖
圖2 mScarlet基因敲入后大腸桿菌基因組序列。(a)敲入位點上下游基因圖譜及測序組裝示意圖,(b)敲入位點上下游測序序列峰形圖。
圖3 熒光顯微鏡下大腸桿菌NC101突變株細胞圖像。(a)白光下細胞圖片,(b)594 nm光源激發后細胞圖片。